产品介绍
筛选目标蛋白后在样本中进行验证的方法良多，常用方法有基于质谱的PRM、基于抗体的蛋白质免疫印记（western blot， WB）和酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA），另有其它方法，如免疫组织化学（通过化学反 应使标记抗体的显色剂显色来确定细胞内蛋白定位、定性及相对定量信息），实时荧光定量PCR（通过测定基因相对含量 信息侧面验证差异蛋白准确性）。
Western Blot及ELISA依赖于抗原/抗体对目标蛋白进行定量，然而很多蛋白都没有成熟业化抗体，即使有抗体，也难以保证特异性及稳定性，且单次实验通量低、成本高，由于以上弊端极大限制了蛋白组后期 的商验证工作。基于质谱的目标蛋白检测技术-PRM很好的克服了以上缺陷，无需抗体且单次可检测多达几十种蛋白。 平行反应监测（PRM）是一种使用高分辨率质谱仪（如Orbitrap Exploris 480）对目标蛋白检测的方法。在PRM中，肽段的前体离子被第一个四极杆质量过滤器（Q1）分离出来，前体离子经过C-Trap进入多级离子通道，通过高能碰撞解 离将肽段离子的肽键随机断裂形成碎片离子，碎片离子随后返回C-trap并被 Orbitrap采集质荷比，从而得到目标肽段二级谱图。
PRM 靶向定量蛋白组工作流程
PRM靶向定量蛋白组工作流程较为复杂，大致分为以下步骤：1）根据生物学问题或临床问题确定感兴趣蛋白质；2）对 实际检测样本蛋白质混合液进行DDA检测，确定目标蛋白肽段，并挑选unique肽段用于后期PRM检测；3）建立目标肽 段采集方法，包括前体离子m/z、肽段洗脱时间、仪器参数等；4）在待测样本中进行目标肽段LC-MS/MS分析；5）对采 集后数据进行处理，以确定目标肽的身份，并根据提取的离子色谱图（XIC）确定分析物丰度。
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