CUT&Tag技术的核心是在Tn5上融合了protein A/G抗体结合功能域的转座体pAG-Tn5。在进行CUT&Tag实验时,首先进行靶蛋白特异性抗体(一抗)孵育,使抗体进入细胞与靶蛋白结合。为了放大信号,同理接着进行二抗孵育。最后孵育pAG-Tn5转座体,使得转座体进入细胞并与抗体结合,这样就把转座体间接的固定在靶蛋白上,随后激活Tn5酶的切割活性,切断靶蛋白结合的DNA区域。由于Tn5连有测序接头,在打断的同时直接在片段化的DNA上加接头,接着提取DNA,进行PCR扩增构建文库。
尽管CUT&Tag与ChIP方法在某些方面类似,但CUT&Tag实验的起始材料是活的可渗透细胞或分离的细胞核,而不是ChIP-seq中使用的甲醛交联的细胞或组织。CUT&Tag有望将蛋白与染色质DNA互作的研究变成了一种类似PCR反应的常规操作,对基因调控、表观遗传等领域的研究具有重要的意义。
更好的信噪比和更低的背景;
样本起始量低,测序通量高,单碱基分辨率;
检测整个基因组中的蛋白质/DNA结合和组蛋白修饰位点;
精确定位蛋白质与DNA的结合位点;
灵敏度高,可以检测细胞中少至几个拷贝的稀有片段;
样本类型 | 建议送样量 | 存储介质 | 保存、运输条件 |
新鲜细胞 | >30w | 有10%FBS的常用培养基 | 碎冰运输,冰袋运送注意温度勿过低导致悬液冻结 |
冻存细胞 | >30w | 冻存液(10%DMSO,30%血清(FBS)培养基) | -80℃保存,干冰运输 |
动物组织 | >30mg | / | -80℃保存,干冰运输 |
植物组织 | >500mg | / | 预冷的锡箔纸包裹储存在-80°C,干冰运输 |