技术原理

技术原理 SEERNA®ISH RNA荧光原位检测是基于信号放大的单分子 RNA 荧光原位杂交技术,通过配对设计的 DNA 连接探针(DLPs)与靶标 RNA 分子互补配对结合,然后使用具有以RNA为模板进行DNA连接能力的连接酶,进行 DLPs 的第一步连接成半环;之后以互补的 DNA 为模板,在 Splint连接酶的作用下实现 DLPs 的成环;随后在 DNA 聚合酶的作用下,进行滚环扩增反应实现信号放大;最后在滚环扩增产物上,杂交带有单个荧光基团标记的检测探针,进行荧光显微拍照成像。
实验流程
(1)样本前处理
冰冻样本:切片退冻、固定、脱水和透化等,以便探针和反应所需的酶等成分进入; FFPE样本:烤片、脱蜡、复水、固定、复性、透化和脱水等。
(2)探针杂交与滚环扩增:探针与RNA杂交之后连接成环,通过滚环扩增放大信号;
(3)荧光成像:检测探针携带特定荧光基团,与靶标基因杂交探针特异性结合,在显微镜下选择合适的荧光滤块和曝光 时间进行扫描成像,通过识别荧光信号确定该位置靶向结合的基因;
(4)图像分析:在组织图像中标记每个靶基因,可以进行信号点计数分析。
产品优势
(1) 高效、特异、高敏
(2) 高信噪比
(3) 可实现256种靶标分子检测
(4) 亚细胞分辨率
技术优势

产品性能 - 单RNA分子检测
- 探针设计特异性强
- 5~10对探针/靶标、灵敏度高
- 信号放大、信噪比高
荧光通道 - DAPI 通道、GFP/Cy3/Cy3.5/Cy5/Cy7 通道均适用
- (Alexa Fluor 488/Cy3/Texas Red/Cy5/Alexa Fluor 750)
样本和靶标
靶标:同时检测1~4个靶标RNA(mRNA、LncRNA、circRNA、可变剪切等)
样本:细胞爬片、新鲜冰冻OCT包埋组织切片(FF) 、福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织切片和固定后冰冻组织切片