技术原理

技术原理 SEERNA®ISH RNA荧光原位检测是基于信号放大的单分子 RNA 荧光原位杂交技术，通过配对设计的 DNA 连接探针（DLPs）与靶标 RNA 分子互补配对结合，然后使用具有以RNA为模板进行DNA连接能力的连接酶，进行 DLPs 的第一步连接成半环；之后以互补的 DNA 为模板，在 Splint连接酶的作用下实现 DLPs 的成环；随后在 DNA 聚合酶的作用下，进行滚环扩增反应实现信号放大；最后在滚环扩增产物上，杂交带有单个荧光基团标记的检测探针，进行荧光显微拍照成像。

实验流程

（1）样本前处理

     冰冻样本：切片退冻、固定、脱水和透化等，以便探针和反应所需的酶等成分进入；             

     FFPE样本：烤片、脱蜡、复水、固定、复性、透化和脱水等。 

（2）探针杂交与滚环扩增：探针与RNA杂交之后连接成环，通过滚环扩增放大信号； 

（3）荧光成像：检测探针携带特定荧光基团，与靶标基因杂交探针特异性结合，在显微镜下选择合适的荧光滤块和曝光时间进行扫描成像，通过识别荧光信号确定该位置靶向结合的基因； 

（4）图像分析：在组织图像中标记每个靶基因，可以进行信号点计数分析。

产品优势

(1) 高效、特异、高敏

(2) 高信噪比

(3) 可实现256种靶标分子检测

(4) 亚细胞分辨率

技术优势

产品性能

• 单RNA分子检测

• 探针设计特异性强

• 5~10对探针/靶标、灵敏度高 

• 信号放大、信噪比高

 荧光通道

• DAPI 通道、GFP/Cy3/Cy3.5/Cy5/Cy7 通道均适用 

• （Alexa Fluor 488/Cy3/Texas Red/Cy5/Alexa Fluor 750）

样本和靶标

靶标：同时检测1~4个靶标RNA（mRNA、LncRNA、circRNA、可变剪切等）

样本：细胞爬片、新鲜冰冻OCT包埋组织切片（FF） 、福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片和固定后冰冻组织切片

检测结果展示

1. 细胞爬片

2. 新鲜冰冻OCT包埋组织切片（FF） 

3. 福尔 马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片

4. 固定后冰冻组织切片