技术原理
(10x Genomics单细胞转录组为例)
1. 形成GEMs 基于微流控芯片形成油包水(GEMs),每个油包水内含有一个细胞、一个gel bead以及逆转录需要的引物试剂和酶等,单个GEM内可进行独立逆转录反应互不干扰。
2. 标记细胞和RNA分子 Gel bead上带有标签,GEMs进行逆转录,可将10x barcode(10x BC,用来标记细胞)、UMI(标记本底RNA进行定量)加在每个mRNA分子上。
3. 巢式PCR富集全长V(D)J序列 基于T细胞和B细胞VDJ序列设计巢式PCR引物,富集全长V(D)J序列
实验流程

技术优势
1)可实现成对的重链和轻链(B细胞)或α和β链(T细胞)的全长测序;
2)精细到单细胞水平,能获得大量单细胞的免疫组库数据;
3)同批样本可同时获得mRNA表达谱数据和免疫组库数据;