产品描述
单细胞Fixed RNA为10x Genomics于2022年3月推出的新产品,采用4%的PFA对细胞进行固定,锁定RNA的表达状态,建库时通过探针杂交捕获基因,可覆盖18,000多个基因,解决了单细胞样本储存、多样本批量处理以及混样测序的问题,让单细胞转录组的研究更加灵活。
Fixed RNA可以保留脆弱细胞或动态的生物学状态,将分析扩展到更多样本,样本固定后集中处理,在同一次运行中批量操作实验和分析,最大限度减少实验可变性和批次效应,单通道中最多可混16个样品,每个样本捕获8,000-10,000细胞,单张芯片最多可混128个样本,最多可得1,024,000个细胞,混样大大降低实验成本。
产品优势
扩大了样本范围:能对FFPE细胞和组织,以及PFA固定样本进行单细胞测序分析,而不再受限于是否有新鲜组织可用,可以解锁大量储存在医院以及生物样本库中的 FFPE 样本的宝贵信息。
提升了低表达基因检测灵敏度:特异性的探针设计,根据Flex和3’转录组的实测对比数据结果,在多种样本类型中,相同的测序数据量下,Flex所得的测序数据饱和度更高,探针灵敏度更强,单个细胞内可以检测到的基因数更多。
减少了样本采集运输难度:采集方面,样本的及时固定,可使取样更灵活,扩散到多个采集点的同时减少取样时间限制。运输方面,长距离运输的压力变小,也适合多中心合作的应用场景。
降低批次效应:对于获取时间不规律的肿瘤样本、发育生物学中同一来源不同时间点的样本、治疗预后相关的临床样本等场景中样本分批次采集的情况,可以应用Flex同批次进行杂交建库实验。实验梯度设置更准确,同时降低结果可变性。
锁定瞬时表达:对于异质性较强,生物学状态快速变化的样本,其细胞离体后,可能会受到较多外界压力和影响,Flex经过PFA及时固定,已经锁定了样本瞬时的表达状态。非常适合濒死样本、多阶段变化样本、脆弱样本、需先进行病理分型的样本等。
方便与Cytassist空转联合分析:Flex技术与Visium Cytassist空转技术结合,通过同一套探针对同一FFPE样本进行单细胞转录组和空间转录组研究,基因表达一致性更高,数据联合分析匹配性更好。
实验流程
样本类型 | 建议送样量 | 存储介质 | 保存、运输条件 |
FFPE | A.切片组织面积大于1cm2,切片表面无划痕,无干裂,均匀贴片的石蜡切片; B.切片组织细胞>30000个;有核细胞比例>80%;肿瘤细胞比例>20%,白片厚度5~ 10um,需3-5片,组织面积偏小或细胞核占比未达80%以上,需提供5-12片; C.石蜡块:厚度4mm以上,组织约绿豆大小以上; D.蜡卷:厚度25um左右,2-5卷 | / | 4℃或常温保存和运输 |
新鲜组织 | >50mg | 存放于组织保存液中,最多可保存48h,单个样本用量1.5ml即可 | 碎冰运输,冰袋运送注意温度勿过低导致悬液冻结 |
单细胞悬液 | >1x10^5 | 存放于DPBS中,可添加FBS或BSA保持细胞活性,运输勿超过4h | 碎冰运输,冰袋运送注意温度勿过低导致悬液冻结 |
冻存细胞 | >1x10^5 | 存放于细胞冻存液中,细胞冻存液可用DMEM+20%FBS+10%DMSO | -80℃保存,干冰运送,干冰用量按照每天4KG |
冷冻组织 | >50mg | .1.5ml离心管液氮速冻 | -80℃保存,干冰运送,干冰用量按照每天4KG |
OCT包埋 冷冻组织 | >50mg | / | -80℃保存,干冰运送,干冰用量按照每天4KG |
4%甲醛 固定细胞 | >1x10^5 | / | -80℃保存,干冰运送,干冰用量按照每天4KG |
4%甲醛 固定组织 | >50mg | / | -80℃保存,干冰运送,干冰用量按照每天4KG |